技术研究
邱毅, 郭丽萍, 旺杰次仁, 洛丹, 达娃卓玛, 兰钧
目的:建立二十五味珊瑚丸中乌头双酯型生物碱限量的检查方法,以完善其质量标准。方法:采用混合型阳离子交换反相吸附树脂固相萃取柱对二十五味珊瑚丸样品进行纯化,制备供试品溶液;采用液相色谱法,使用Waters XBridge® C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,以甲醇、乙腈和0.1%磷酸溶液为流动相梯度洗脱,流速为1.0 mL · min-1,柱温为30 ℃,检测波长为235 nm;采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)对二十五味珊瑚丸中乌头双酯型生物碱的成分进行确认,使用ACQUITY UPLC® BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7 μm)色谱柱,梯度洗脱模式下,以0.1%甲酸(含5 mmol · L-1甲酸胺)-甲醇为流动相,电喷雾离子源(正离子模式),监测模式为多反应监测。结果:在液相色谱法中,阴性溶液在此无干扰,与相邻色谱峰分离良好,乌头碱进样量在102.376~4128.048 ng范围内呈良好的线性关系(R2>0.9998),平均加样回收率为93.8%,RSD=2.3%(n=6)。17批次样品均未检出新乌头碱、次乌头碱,其中5批次样品在与乌头碱对照品色谱峰相应的位置上,有相同的色谱峰,均小于拟定的限度;LC-MS/MS法中3种乌头双酯型生物碱均有良好的专属性,阴性溶液在此无干扰,确认结果与液相色谱法结果一致。结论:所建立的方法能准确地测定二十五味珊瑚丸中乌头碱的含量,专属性强、灵敏度高,能为安全有效控制二十五味珊瑚丸质量提供参考。